Taqman多重实时荧光PCR同步定量检测六种动物源性成分方法的建立

分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2017-07-24 合作期刊: 《中国生物工程杂志》

付理文 张宇 依含 李雪 朱乃硕

摘要： 旨在建立一种可同时检测猪、牛、羊、鸡、鸭、鹅六种动物源性成分的六重荧光定量PCR方法。根据猪、牛、羊、鸡、鸭、鹅细胞核基因组保守序列，参照序列比对结果选择差异位点设计6对特异性引物和6条以不同荧光素标记的Taqman 探针。通过对PCR 反应体系和反应条件的优化筛选，建立能同步定量检测猪、牛、羊、鸡、鸭、鹅源性成分的六重实时荧光定量PCR方法。应用此方法分别对18种不同源性动物DNA和200 份不同来源样品进行猪牛羊鸡鸭鹅源性成分检测，结果表明，所建立的六重荧光定量PCR方法灵敏度高，对六种动物的最低核酸检测量分别为0.049ng、0.048ng、0.085ng、0.13ng、0.162ng、0.074ng（50μl体系）；特异性强，对狗、兔、鼠、驴、马、骆驼等其他12种动物无特异性扩增；200份样品的检测结果表明六重qPCR检测方法敏感，同一反应体系下实现一次对6种动物快速定量检测，耗时短、效率高、适用性广，可用于肉品、奶品、皮毛和饲料等动物产品猪牛羊鸡鸭鹅源性成分单一或混合物种的鉴别诊断。

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