分类： 医学、药学 >> 基础医学 提交时间： 2017-12-27 合作期刊: 《南方医科大学学报》
摘要： 目的 探讨obatoclax联用MG-132对人食管癌细胞是否具有协同的抗肿瘤作用。方法 MTT法检测obatoclax与MG-132对人食管癌细胞CaES-17的细胞毒作用，根据IC50确定两药联用的浓度比（1∶2.4），将两个药物从4 IC50的作用浓度起倍比稀释，用CompuSyn软件计算两药的联用指数（CI）。采用Western blot方法研究药物对ubiquitin表达、PARP蛋白剪切、caspase-9蛋白剪切、phospho-Histone H3蛋白及phospho-Aurora A/B/C蛋白表达的影响。采用流式细胞术检测细胞早期凋亡（Annexin-V阳性率）及细胞周期的影响。结果 Obatoclax与MG-132联合处理人食管癌细胞CaES-17，对细胞抑制率为50%及95%时相对应的 CI值分别为 0.296及 0.104，具有明显的协同抗肿瘤作用。单用 obatoclax或 MG-132均能诱导 ubiquitin表达增加、PARP及caspase-9发生剪切，且联用组与单用组相比有统计学差异（P0.05）。同时，联用组Annexin-V阳性率及sub-G1期及G2/M期细胞百分比与单用组相比都显著增加，且差异均有统计学意义（P<0.05）。结论 Obatoclax联用MG-132对人食管癌细胞CaES-17具有协同抗肿瘤作用，且与诱导肿瘤细胞发生凋亡及G2/M期阻滞有关。
分类： 医学、药学 >> 基础医学 提交时间： 2017-12-07 合作期刊: 《南方医科大学学报》
摘要： 目的 构建WTX CDS区全长重组慢病毒表达载体，感染结直肠癌SW620细胞，建立WTX稳定高表达结直肠癌SW620细胞株。 方法 将WTX基因全长CDS区插入GV287慢病毒质粒载体，重组载体与包装载体共转染人胚肾293T细胞，收集上清、浓缩得到表达WTX的重组慢病毒。慢病毒感染结直肠癌SW620细胞，荧光显微镜初步观察感染效率，G418进一步筛选得到稳定感染细胞株。QPCR及Western blotting检测WTX过表达效率。每部分均设立相应对照。结果 载体片段测序结果示成功构建了WTX重组表达载体；包装病毒滴度检测适中，提示WTX表达慢病毒包装成功；慢病毒感染结直肠癌SW620细胞后，WTX基因mRNA以及蛋白表达水平明显增高，有统计学意义，提示SW620结直肠癌细胞WTX高表达稳定株构建成功。 结论建立慢病毒感染方法的结直肠癌SW620细胞WTX过表达稳定细胞株，为进一步研究WTX对结直肠癌发生、发展的作用机制提供分子生物学工具。
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