分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2018-05-16 合作期刊: 《中国生物工程杂志》
摘要： 目的：慢病毒载体(Lentiviral vector ，LVV)是一种有效的基因治疗导入系统。本研究拟用已研发的携带人的β-珠蛋白基因自删除慢病毒载体，优化其表达有效性和提高其病毒颗粒数。方法：首先，比较三款不同的启动子预测软件的分析结果，分别构建三种不同长度启动子的表达β-珠蛋白基因（β-globin）的LVV，并对其Ⅱ号内含子进行部分删减；用经优化的LVV转导β-地中海贫血（β-地贫）的小鼠诱导性多能性干细胞（induced pluripotent stem cells，iPSC）后，进而用此iPSC制备嵌合体小鼠模型；经RT-PCR、血涂片瑞氏吉姆萨染色等观察分析其功能性代偿的潜能。研究结果：经优化后的自删除慢病毒载体病毒对其病毒颗粒数的滴度影响不大（2.3×1011PLs/ml），可在嵌合体小鼠模型体内检测到正常人β-珠蛋白基因的功能性表达。结论：优化了表达人β-珠蛋白基因的自删除LVV。
分类： 医学、药学 >> 基础医学 提交时间： 2017-12-07 合作期刊: 《南方医科大学学报》
摘要： 目的探讨利用载小干扰RNA(small interfering RNA, siRNA)的脂质微泡超声造影剂实现恶性肿瘤基因治疗与疗效评估一体化的可行性。方法以异质性组装法制备载siRNA的脂质微泡，并用动态光散射法检测其直径大小和表面电位。通过激光共聚焦显微镜观察红色荧光标记的siRNA在瘤内的分布。针对抗凋亡基因sirloin 2(SIRT2)设计siRNA，通过在体实验研究载siRNA微泡在超声辐照下的肿瘤基因沉默效果。在用载siRNA微泡治疗肿瘤的同时，以超声造影技术观察肿瘤治疗效果结果siRNA微泡的直径为400.7±30.5 nm，表面带弱正电(+8.8±0.8 mV) siRNA微泡协同超声辐照能高效地将siRNA递送到肿瘤细胞胞浆内，有效沉默肿瘤组织中的SIRT2基因，诱导肿瘤凋亡，明显减缓肿瘤的生长速度。超声造影检查结果提示，载siRNA微泡具有良好的超声显像效果，能在治疗过程中实时评估肿瘤的血供情况。结论新型载siRNA的脂质微泡超声造影剂在活体上能对肿瘤进行基因沉默治疗，同时观察肿瘤治疗效果，实现恶性肿瘤基因治疗与疗效评估的一体化。
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