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1. chinaXiv:201810.00106 [pdf]

长链非编码RNA SNHG3对人乳腺癌细胞MCF-7增殖, 迁移与侵袭的影响

万群; 刘梦瑶; 夏菁; 苟理尧; 唐敏; 孙恃雷; 张彦
Subjects: Biology >> Bioengineering

目的:探讨长链非编码RNA SNHG3对人乳腺癌细胞MCF-7增殖,迁移与侵袭的影响。方法:构建SNHG3过表达质粒,实验分别设置阴性对照组(pcDNA-3.1+)与SNHG3基因过表达组(pcDNA-3.1+/SNHG3)。将MCF-7细胞转染对照组质粒和SNHG3过表达质粒,采用实时定量PCR 方法检测 SNHG3 mRNA 转录水平,Western blot 检测MMP9及EMT相关蛋白水平;集落形成实验检测MCF-7细胞增殖能力;划痕愈合实验检测MCF-7细胞横向迁移能力; Transwell 小室实验检测MCF-7细胞纵向迁移能力及侵袭能力;结果:过表达SNHG3后,MCF-7细胞中SNHG3的mRNA水平显著增高(P<0.001);MCF-7细胞的体外增殖能力明显增加(P<0.01),迁移(P<0.01)与侵袭能力(P<0.001)也显著增强,实时定量PCR, Western blot 结果显示SNHG3可激活EMT相关通路。结论: 过表达SNHG3可能通过激活EMT通路促进乳腺癌MCF-7细胞的增殖,迁移与侵袭。

submitted time 2018-10-15 From cooperative journals:《中国生物工程杂志》 Hits2160Downloads508 Comment 0

2. chinaXiv:201801.00658 [pdf]

丙泊酚下调水通道蛋白3和基质金属蛋白酶-9表达抑制人肺癌A549细胞的侵袭力

叶慧瑾; 白建杰; 郭培培; 汪威; 林春水
Subjects: Medicine, Pharmacy >> Preclinical Medicine

目的 探讨丙泊酚对人肺癌A549细胞水通道蛋白3(AQP-3)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达及其侵袭力的影响。方法 A549细胞经丙泊酚不同剂量(25、 50、100 μmol/L)和不同时间(12、 24 h)处理。用RT-PCR方法观察丙泊酚对A549细胞AQP-3 mRNA的作用, 用Western Blot方法和Transwell侵袭实验分别检测不同浓度丙泊酚作用24 h对A549细胞AQP-3、MMP-9蛋白 表达和细胞侵袭力的影响。结果 与空白组比较,25、50、100 μmol/L丙泊酚24 h处理组对AQP-3 mRNA表达的最大抑制比 值为0.13,最小0.41; 12 h处理组最大抑制比值0.19,最小0.65,差异有统计学意义(P<0.05);丙泊酚100 μmol/L组24 h达到最 大抑制效果(0.13±0.035)。25、 50、100 μmol/L丙泊酚24 h处理组AQP-3蛋白表达(0.91±0.009, 0.60±0.020, 0.57±0.006)和50、 100 μmol/L丙泊酚24 h处理组MMP-9蛋白表达(0.65±0.006, 0.46±0.021),较空白组明显降低(P<0.05)。25、 50、100 μmol/L丙泊酚 24 h处理组的穿膜细胞数(122.55±17.20, 96.33±5.82, 74.33±2.85),较空白组(199.33±23.88)明显减少(P<0.05)。结论 丙泊酚 50、100 μmol/L处理24 h,可下调人肺癌A549细胞AQP-3 mRNA、AQP-3蛋白和MMP-9蛋白的表达,抑制A549细胞的侵袭力。

submitted time 2018-01-25 From cooperative journals:《南方医科大学学报》 Hits665Downloads389 Comment 0

3. chinaXiv:201712.00923 [pdf]

干扰内皮素-1 可抑制鼻咽癌细胞增殖、迁移和侵袭

林少雄; 张永; 鲁娟; 刘雄; 李湘平
Subjects: Medicine, Pharmacy >> Preclinical Medicine

目的 探讨干扰内皮素-1(ET-1)基因对鼻咽癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响以及相应的分子机制。方法 构建 ET-1shRNA慢病毒干扰载体,成功包装慢病毒后感染鼻咽癌5-8F细胞。Western blotting检测ET-1干扰效率。利用MTT、细胞周期检测、平板克隆形成实验、Transwell小室、Boyden小室以及裸鼠皮下成瘤实验分别检测细胞增殖、迁移、侵袭能力的改变。Western blotting 检测上皮间质转化(EMT)相应基因表达改变。结果 与对照组细胞相比,鼻咽癌细胞 5-8F 感染慢病毒shRNA-ET-1后ET-1的表达水平显著降低。MTT实验结果显示,在抑制ET-1表达后细胞增殖能力显著下降。流式细胞仪检测细胞周期显示干扰ET-1表达,G1细胞数明显增多。平板克隆形成实验结果显示干扰 ET-1表达,癌细胞克隆形成能力显著下降。皮下裸鼠成瘤实验结果同样显示,ET-1表达抑制后癌细胞成瘤能力显著下降。Transwell和Boyden小室结果表明,ET-1表 达沉默后可显著降低细胞的迁移和侵袭能力。通过检测 ET-1 沉默后 EMT 相关分子的表达改变,结果显示上皮标志物E-cadherin和CK18表达增高,而间质标志物Vimentin和N-cadherin表达降低。结论 ET-1在鼻咽癌中可通过调控上皮间质转化相关基因促进细胞增殖、迁移和侵袭能力。

submitted time 2017-12-27 From cooperative journals:《南方医科大学学报》 Hits226Downloads147 Comment 0

4. chinaXiv:201712.00926 [pdf]

埃兹蛋白477位酪氨酸的磷酸化在神经生长因子前体促进乳腺癌细胞侵袭中起关键作用

李福喜; 邵文凤; 唐芮; 于晓然; 温桥生; 余焱林; 熊静波
Subjects: Medicine, Pharmacy >> Preclinical Medicine

目的 研究神经生长因子前体(precursor of nerve growth factor, proNGF)促进乳腺癌细胞侵袭的作用与埃兹蛋白(ezrin)表达水平及其567位苏氨酸(Thr567)和477位酪氨酸(Tyr477)的磷酸化的相互关系。方法 用梯度浓度的proNGF(0、2.5、5和10 ng/mL)刺激人乳腺癌细胞系 MDA-MB-231和 MCF-7,用 Transwell侵袭实验检测 proNGF对 MDA-MB-231和 MCF-7侵袭的影响;用免疫印迹法检测 ezrin蛋白的表达水平,ezrin Thr567和 ezrin Tyr477磷酸化水平的变化;在 MDA- MB-231中转染pEnter-His-ezrinY477F质粒(ezrin显性负突变质粒),研究ezrin Tyr477磷酸化在proNGF促进乳腺癌细胞侵袭中的作用。结果proNGF以浓度依赖的方式促进 MDA-MB-231和 MCF-7的侵袭(P<0.05);proNGF以浓度依赖和时间依赖的方式显著升高ezrin Tyr477磷酸化,而对ezrin蛋白的表达以及其Thr567磷酸化无明显影响;Src激酶特异抑制剂SKI-606显著抑制proNGF对ezrin Tyr477磷酸化的促进作用;转染pEnter-His-ezrinY477F抑制proNGF对MDA-MB-231细胞ezrin Tyr477磷酸化和侵袭能力的促进作用(P<0.05)。结论 ezrin Tyr477磷酸化在proNGF促进乳腺癌细胞侵袭中起关键作用;proNGF通过激活Src激酶使ezrin Tyr477发生磷酸化。

submitted time 2017-12-27 From cooperative journals:《南方医科大学学报》 Hits518Downloads260 Comment 0

5. chinaXiv:201712.00935 [pdf]

DHA对宫颈癌细胞株凋亡、侵袭和转移的影响

杨翠; 张广平; 陈咏宁; 孟凡良; 刘士三; 龚时鹏
Subjects: Medicine, Pharmacy >> Preclinical Medicine

目的 探讨多不饱和脂肪酸DHA对宫颈癌细胞(HeLa、Siha)凋亡、迁移侵袭的影响。方法 HeLa、Siha细胞,分为空白对照组、不同浓度DHA组,观察不同药物浓度作用于宫颈癌细胞后的形态学改变,Hoechst 33258染色检测48 h后细胞核凋亡情况;MTT法检测DHA作用于宫颈癌细胞24、48、72 h后的细胞凋亡情况;流式细胞仪检测不同浓度DHA作用于宫颈癌细胞48 h后的凋亡率;细胞划痕实验和 Transwell迁移实验检测不同浓度DHA对宫颈癌细胞体外迁移能力的影响;Western Blotting检测DHA刺激细胞 48 h后凋亡相关蛋白(Bax、Bcl-2、cleaved-caspase3)及肿瘤转移侵袭相关蛋白 MMP-9、VEGF表达情况。结果倒置显微镜下及经Hoechst33258染色后,随着DHA浓度增加,宫颈癌细胞形态改变越明显,凋亡小体增多;MTT结果显示DHA呈时间-浓度依赖性抑制宫颈癌细胞增殖,促进其凋亡;细胞划痕实验和transwell迁移实验提示DHA作用于细胞后,浓度越高,对细胞的体外迁移能力的抑制作用越强;Western Blotting显示 DHA作用于细胞 48 h后,cleaved-caspase3、Bax蛋白表达增加(P<0.05),而 Bcl-2、MMP-9、VEGF 蛋 白 表 达 下 降(P<0.05),Bcl-2/Bax 比 值 下 降(P<0.05)。 结 论 DHA 可 通 过 调 控cleaved-caspase3、Bax及Bcl-2表达,促进宫颈癌细胞凋亡的作用并能通过降低MMP-9、VEGF的表达抑制宫颈癌细胞的迁移和侵袭。

submitted time 2017-12-27 From cooperative journals:《南方医科大学学报》 Hits193Downloads135 Comment 0

6. chinaXiv:201712.00941 [pdf]

Muc2基因沉默可降低益生菌抑制大肠杆菌黏附和侵袭的能力

邱嘉文; 何肖龙; 张宝; 杜蕾; 曾庆; 李森; 熊欢欢; 龙敏; 罗军; 曹虹
Subjects: Medicine, Pharmacy >> Preclinical Medicine

目的 建立抑制肠上皮细胞基因组中Muc2基因表达的 CRISPR/Cas9系统并探索粘蛋白 Muc2在鼠李糖乳杆菌 GG株(LGG)抑制大肠杆菌 K1(Escherichia coli, E.coli k1)株 E44黏附和侵袭肠上皮中的作用机制。方法 设计 2个长 20~25 bp的sgRNA分别靶向Muc2,合成sgRNA寡核苷酸序列并构建CRISPR表达载体,转染野生型人结肠癌Ht29细胞,蛋白免疫印迹法检测抑制效率及通过MTT法检测其细胞活力及生长情况后,竞争性排斥分析验证粘蛋白Muc2在益生菌抑制E44黏附侵袭肠上皮中的作用。结果 目的sgRNA寡核苷酸双链成功插入酶切后的lenticrisprv2质粒载体中且序列正确;稳定抑制Muc2表达的细胞株筛选成功;Muc2基因沉默后,与空白对照组相比,其表达水平明显降低,抑制率可达81%(P<0.01);黏附侵袭实验中E44相对黏附率为 72.23%(P<0.01),相对侵袭率为 81.49%(P<0.01),益生菌 LGG的抑制 E44黏附和侵袭作用明显下调。结论Muc2基因下调明显降低益生菌抑制E44黏附和侵袭肠上皮细胞的能力,提示益生菌刺激Muc2表达上调可能是其强化加固肠粘 膜屏障和拮抗致病菌功能的关键性机制之一,并可为肠道细菌性感染疾病的预防治疗提供了一个新手段。

submitted time 2017-12-27 From cooperative journals:《南方医科大学学报》 Hits395Downloads215 Comment 0

7. chinaXiv:201712.00942 [pdf]

二烯丙基二硫下调p38活性抑制乳腺癌MCF-7细胞侵袭和转移

陈霄霄; 刘晓旺; 周志刚; 陈雪艳; 李丽丁; 熊婷; 彭露; 涂剑
Subjects: Medicine, Pharmacy >> Preclinical Medicine

目的 探讨大蒜提取物二烯丙基二硫(DADS)对乳腺癌 MCF-7细胞侵袭转移的作用及其机制。方法 采用不同浓度(0,100,200,400 μmol/L)DADS处理MCF-7人乳腺癌细胞24 h,Transwell侵袭实验检测DADS对细胞侵袭的作用,划痕愈合实验观察 DADS对细胞迁移的改变,Western blotting检测细胞中上皮标志蛋白 E-钙黏蛋白(E-cadherin)、间质标志蛋白波形蛋白(Vimentin)和基质金属蛋白MMP-9的表达和p38活性;TGF-β1上调p-p38表达后上述作用的变化。结果 Transwell和划痕愈合实验发现 DADS呈浓度依赖性抑制 MCF-7细胞的侵袭和迁移能力,Western blotting结果表明 DADS可抑制 Vimentin和MMP-9的蛋白表达,上调 E-cadherin的表达而下调 p38活性;TGF-β1可上调 p-p38和MMP-9表达,明显抵消DADS对MCF-7细胞的抑制效果。结论 DADS可下调p38活性,抑制MCF-7细胞的侵袭转移。

submitted time 2017-12-27 From cooperative journals:《南方医科大学学报》 Hits264Downloads172 Comment 0

8. chinaXiv:201712.00944 [pdf]

siRNA干扰相互作用蛋白1表达抑制胶质瘤细胞的侵袭和迁移

向伟; 漆松涛; 刘亚伟; 李和珍; 周强; 易国仲; 陈子阳; 严乐
Subjects: Medicine, Pharmacy >> Preclinical Medicine

目的 探讨小干扰RNA(siRNA)干扰降低PC4和SFRS1相互作用蛋白1(PSIP1)的表达对人胶质瘤U87细胞侵袭和迁移的影响并初步探讨其机制。 方法 采用化学合成靶向PSIP1的siRNA,脂质体法转染U87细胞,用Real-time PCR检测RNA干扰效率;Transwell侵袭实验测细胞侵袭能力;划痕实验检测其迁移能力;干扰PSIP1表达后,Western blot 检测间质细胞来源的N-cadherin、β-catenin蛋白和转录因子Slug的表达。 结果 PSIP1-siRNA 转染胶质瘤U87细胞后,PSIP1的mRNA水平及蛋白水平明显下降(P<0.001),U87 细胞侵袭和迁移能力下降,与阴性转染组及未转染组相比差异有统计学意义(P<0.001,P<0.001),Western blot 显示,间质细胞来源的 N-cadherin、β-catenin 蛋白表达量降低,同时与上皮间质转化(EMT)相关的转录因子 Slug 的表达降低。 结论 在胶质瘤中,抑制 PSIP1 的表达可抑制肿瘤细胞的侵袭和迁移,N-cadherin、β-catenin 蛋白和转录因子Slug的表达量降低,提示 PSIP1 可通过调控经典 Wnt/β-catenin 信号通路来调节 Slug 的表达,进而调控 EMT,从而参与胶质瘤 U87 细胞的侵袭及迁移。

submitted time 2017-12-27 From cooperative journals:《南方医科大学学报》 Hits683Downloads369 Comment 0

9. chinaXiv:201712.00975 [pdf]

Nanog通过升高PKC?的表达促进乳腺癌细胞的侵袭

邵文凤; 李福喜; 唐芮; 于晓然; 温桥生; Yanlin Yu; 熊静波
Subjects: Medicine, Pharmacy >> Preclinical Medicine

目的 研究Nanog促进乳腺癌细胞侵袭与ezrinT567磷酸化的关系及Nanog调节ezrinT567磷酸化的可能机制。方法 转染靶向Nanog的siRNA敲低乳腺癌细胞Nanog;用transwell法检测乳腺癌细胞侵袭;用免疫印迹检测乳腺癌细胞Nanog、PKCε表达水平和 ezrinT567磷酸化水平;用免疫共沉淀和免疫印迹检测 PKCε和 ezrin蛋白的相互作用。结果 敲低乳腺癌细胞的Nanog,PKC?蛋白表达下降、ezrinT567磷酸化水平下降、乳腺癌细胞的侵袭能力下降;敲低 PKCε降低 ezrinT567磷酸化水平;PKC?与 ezrin可免疫共沉淀。结论 Nanog可上调 PKC?的表达,后者可使ezrinT567磷酸化,这可能是 Nanog促进肿瘤转移的一个新机制。

submitted time 2017-12-27 From cooperative journals:《南方医科大学学报》 Hits456Downloads256 Comment 0

10. chinaXiv:201712.01034 [pdf]

miR-181b通过靶向调控N-myc下游调节基因2影响骨肉瘤细胞的迁移和侵袭

邵建立;李志忠;王亮;焦根龙;周志刚;孙国栋
Subjects: Medicine, Pharmacy >> Preclinical Medicine

目的 探讨miR-181b对骨肉瘤细胞迁移和侵袭的影响。方法 培养骨肉瘤细胞,实时荧光定量PCR检测miR-181b在骨肉瘤细胞中的表达。抑制miR-181b的表达,Transwell检测对骨肉瘤迁移和侵袭的影响;生物信息学分析miR-181b靶基因并采用荧光素酶报告基因分析miR-181b和靶基因在骨肉瘤中是否直接作用,同时采用Western Blotting检测靶基因在骨肉瘤细胞中的表达以及Transwell检测靶基因对骨肉瘤迁移和侵袭的影响。结果 实时荧光定量PCR结果表明miR-181b在骨肉瘤细胞中高表达。抑制miR-181b的表达能够抑制骨肉瘤细胞的迁移和侵袭;生物信息学分析表明N-myc下游调节基因2(NDRG2)是miR-181b直接作用的靶基因,荧光素酶报告基因分析验证了该结果;Western blotting检测表明NDRG2在骨肉瘤中低表达,而抑制miR-181b能够显著提高NDRG2的表达。抑制miR-181b的表达的同时抑制靶基因NDRG2的表达,能够逆转抑制miR-181b的表达对骨肉瘤细胞的迁移和侵袭的影响,从而显著提高骨肉瘤细胞的迁移和侵袭。结论 miR-181b在骨肉瘤中过表达,NDRG2为miR-181b直接调控靶基因,抑制miR-181b能够提高NDRG2的表达从而抑制骨肉瘤细胞的迁移侵袭。

submitted time 2017-12-27 From cooperative journals:《南方医科大学学报》 Hits260Downloads154 Comment 0

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