序列优化的小鼠IL-33基因在哺乳动物细胞中的有效分泌表达

分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2018-12-06 合作期刊: 《中国生物工程杂志》

高福兰 齐家龙 舒聪妍 谢航航 黄惟巍 刘存宝 杨旭 孙文佳 白红妹 马雁冰

摘要： 目的：白细胞介素(IL)-33具有重要的免疫调控作用，在疾病中扮演着重要的角色。本文旨在通过基因优化实现IL-33在哺乳动物细胞中的高效表达，为疾病机理研究以及疫苗免疫佐剂应用等提供基础。方法：根据小鼠白细胞介素-33成熟肽(mIL-33)的氨基酸序列，以哺乳动物细胞基因表达密码子偏好性进行基因优化设计;化学合成优化的mIL-33基因片段，通过搭桥PCR将编码人CD8α信号肽的核酸序列分别与优化或未优化的mIL-33基因连接,并与绿色荧光蛋白（EGFP）基因分别构建到双表达单元质粒 pBudCE4.1的不同启动子下;重组质粒经 lipofectamine 3000 和PEI转染293FT 细胞;以 Western blot和ELISA检测重组蛋白的表达;收集表达的mIL-33刺激巨噬细胞Raw264.7，ELISA检测培养上清的TNFα水平，以证明IL-33的生物学活性。结果:重组质粒经酶切鉴定及测序分析证实构建成功; lipofectamine 3000转染效率较PEI转染更高；Western blot和ELISA 结果显示密码子优化的mIL-33表达水平较未优化序列更高，在EF-1α启动子和CMV启动子指导下mIL-33在293FT 细胞表达水平相当，CD8α信号肽成功引导mIL-33的分泌，产物具生物学活性。结论: 密码子优化操作显著改善了 mIL-33在哺乳动物细胞中的表达水平，为进一步研究奠定了基础。

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