分类: 医学、药学 >> 基础医学 提交时间: 2017-12-07 合作期刊: 《南方医科大学学报》
摘要: 目的构建经MHC且通路的屋尘瞒1类变应原Der p 1的T细胞表位肤疫苗重组载体。方法分别合成丁AT ,IhC和含编码Der p 1的3段T细胞表位的融合核昔酸序列,用特异性引物PCR扩增相应的基因片段,分别用相应的双酶切后,用T4 DNA连接酶连接形成TAT-IhC-Der P 1-3T融合基因,并插入至原核表达载体pET-28a(+)中,构建重组原核表达载体pET-28a(+)-TAT-IhC-DerP 1-3T,Bam, H I和Xh} I进行双酶切和测序鉴定。重组载体转化大肠杆菌E. c}li BL21(DE3)菌株,IPTG诱导后,经SDS-PAGE电泳分析和Western blot验证,纯化丁AT-IhC-Der p 1-3T蛋白后进行IgE结合试验。结果双酶切和测序结果表明,成功构建了pET-28a-TAT-IhC-DerP 1-3T重组原核表达载体;SDS-PAGE电泳分析显示TAT-IhC-DerP 1-3T可诱导表达; Western blot检测表明该融合蛋白纯化成功;IgE结合试验表明丁 AT-IhC-Der p 1-3T结合屋尘瞒过敏病人血清IgE的能力强于Der p 1变应原((P<0.001)。结论成功构建了可表达经MHC通路的编码Der p 1的3段T细胞表位的重组pET-28a-TAT-IhC-DerP]一刃载体,纯化的丁AT-IhC-Der p 1-3T具有较强的IgE结合能力,从而为后续经MHC通路的特异性免疫治疗奠定基础。