骨髓间充质干细胞体外培养及肝向分化方案的优化

分类： 医学、药学 >> 基础医学 提交时间： 2017-12-07 合作期刊: 《南方医科大学学报》

向俊西 郑幸龙 祝旭龙(2 ,3) 杨丽斐 高睿 李建辉 刘学民 吕毅

摘要： 目的 优化一套简便、可靠、稳定的大鼠骨髓间充质干细胞分离、培养、鉴定及肝向分化的方案。方法 采用全骨髓差速贴壁法分离提取大鼠骨髓间充质干细胞，通过优化的1.5 h差速贴壁结合12 h首次全量换液方法，及体外改良培养方案实现细胞高效纯化扩增。流式细胞术表面标志物检测结合成脂、成骨、成软骨诱导分化鉴定细胞群。采用添加bFGF、HGF、EGF等多种生长因子的三步诱导法促使骨髓间充质干细胞向肝系分化，并进行形态学、免疫学、基因水平评估。结果 分离纯化的细胞群阳性表达CD29、CD44、CD90，阴性表达CD34、CD45，经成脂、成骨、成软骨诱导液作用后，油红O、茜素红、甲苯胺蓝染色均呈阳性。经三步法肝向诱导处理后，细胞群呈肝样细胞形态改变，表达肝脏特异性标志物ALB、AFP，肝系相关基因表达水平呈时间依赖性逐渐上升。结论 优化后的方案能够简便、可靠、稳定地获得高纯度的大鼠骨髓间充质干细胞，并能在特定微环境作用下实现肝向分化。

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