MicroRNA-196a-5p对3T3-L1前脂肪细胞增殖和分化的影响效应

分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2018-08-29 合作期刊: 《中国生物工程杂志》

杨琼 王灵慧 辜浩 刘进远 堵晶晶 张顺华 朱砺

摘要： 目的：探究miR-196a-5p对小鼠前体脂肪细胞增殖、分化的影响及其潜在的分子机制。方法：①构建小鼠肥胖模型，RT-PCR检测脂肪组织中miR-196a-5p表达量；②鸡尾酒法诱导3T3-L1前脂肪细胞分化，RT-PCR检测分化过程中miR-196a-5p的表达变化；③合成miR-196a-5p mimics和inhibitors转染3T3-L1细胞，以CCK8、EdU试剂盒检测miR-196a-5p对3T3-L1前脂肪细胞增殖的影响作用；④运用油红O染色、甘油三酯测定评估miR-196a-5p对3T3-L1细胞分化的影响；⑤RT-PCR检测miR-196a-5p对前脂肪细胞增殖、分化相关基因的影响；⑥ 结合前人文献，运用生物信息软件、荧光素酶报告系统对miR-196a-5p调控脂肪细胞分化的靶基因进行筛选和验证。结果：①miR-196a-5p在肥胖小鼠脂肪组织中高表达，在3T3-L1前脂肪细胞分化过程中先升高后下降；②与阴性对照组相比，mimics转染抑制了3T3-L1细胞增殖，inhibitors转染促进了3T3-L1细胞增殖；③ 与阴性对照组相比，mimics组积累了大量油红着色的脂滴，甘油三酯含量增多；而inhibitors组的脂滴少而小，甘油三酯含量相对降低；④与阴性对照组相比，mimics转染抑制了增殖标志基因Cyclin D1、Cyclin E、CDK2和CDK4表达，促进了分化标志基因PPARγ、C/EBPα、LPL、aP2等的表达；inhibitors转染则表现出与mimics转染相反的作用；⑤miR-196a-5p可显著抑制野生型MAP4K3和MAPK1 3'UTR荧光素酶活性，而突变绑定位点可废除该抑制效应。结论：miR-196a-5p不仅可抑制3T3-L1前脂肪细胞增殖，还可促进其诱导分化、沉积脂滴；miR-196a-5p可能通过靶向调节MAP4K3和MAPK1来介导3T3-L1前脂肪细胞分化。

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