分类： 生物学 >> 动物学 提交时间： 2018-12-24 合作期刊: 《动物营养学报》
摘要： 本试验旨在确定育王时额外添加不同浓度的叶酸对西方蜜蜂蜂王质量的影响。控制蜂王产卵8 h，孵化后进行人工移虫育王，从移虫第2天起每天用微量进样器给王台内的小幼虫饲喂2 μL分别含有0（Ⅰ组）、0.05（Ⅱ组）、0.25（Ⅲ组）、1.00 mg/kg（Ⅳ组）叶酸的糖水，连续饲喂3 d。蜂王出房时，测其初生重、胸宽，并采用实时荧光定量PCR检测蜂王卵巢中储存蛋白110（hex110）、储存蛋白70b(hex70b）和卵黄蛋白原（Vg）基因的相对表达量。结果表明：Ⅱ组蜂王初生重显著高于Ⅰ组、Ⅲ组和Ⅳ组（P0.05）；蜂王胸宽4组之间差异不显著（P>0.05）；Ⅰ组、Ⅲ组蜂王卵巢中Vg基因的相对表达量显著高于Ⅳ组（P0.05），Ⅱ组与Ⅳ组之间差异也不显著（P>0.05）；随着叶酸浓度的增加，蜂王卵巢中hex110基因的相对表达量先增加后降低，且4组之间差异显著（P0.05）。由此得出，在育王时额外添加叶酸对西方蜜蜂蜂王质量存在影响，额外添加低浓度的叶酸可以增加蜂王的初生重及卵巢中hex110基因的表达，但额外添加高浓度的叶酸会抑制蜂王卵巢中Vg、hex110及hex70b基因的表达，因此，育王时可适当添加低浓度叶酸来提高蜂王质量。
分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2018-10-09 合作期刊: 《中国生物工程杂志》
摘要： 目的：构建噬菌体天然纳米抗体展示库，以期用于筛选不同抗原分子的纳米抗体筛选平台，并用艰难梭菌谷氨酸脱氢酶（GDH）抗原筛选靶向GDH的纳米抗体，对所构建的噬菌体天然纳米抗体展示库进行验证。 方法：采用Oligo DT提取双峰骆驼脾脏总RNA进行反转录，通过巢氏PCR获取全套重链可变区基因，将其构建到噬菌粒pCANTAB5E载体，经多次电转化至E.coil TG1 构建初级噬菌体抗体库，经辅助噬菌体拯救后构成噬菌体展示库，并对噬菌体展示库的库容及多样性进行分析和鉴定。同时以GDH为靶向抗原对文库进行淘筛，计算淘筛回收率，并对第三轮淘筛后平板的单克隆进行ELISA鉴定。 结果：构建的天然噬菌体纳米抗体库的插入率为95%左右，随机挑取的9个克隆氨基酸同源性为66.17%，经MEGA分析后具有较好的多样性，同时经辅助噬菌体拯救后，得到的噬菌体展示库滴度为4×1012 CFU/ml。在三轮淘筛过程中，回收率逐步升高，噬菌体得到了有效的富集，同时对阳性克隆进行测序及分析，最终得到2条抗GDH纳米抗体序列。结论：成功构建了双峰驼源天然噬菌体纳米抗体展示文库且多样性良好，为后续筛选其他的靶向抗原奠定了基础，同时筛选获得两条抗GDH纳米抗体序列，为制备艰难梭菌谷氨酸脱氢酶诊断抗体提供技术支撑。
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