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1. chinaXiv:201712.00803 [pdf]

FoxM1 shRNA慢病毒载体构建及感染人前列腺癌细胞的稳定细胞株筛选

王一茹; 姚斌伟; 张艳; 张明博; 高菡静; 唐杰
Subjects: Medicine, Pharmacy >> Preclinical Medicine

目的 构建携带绿色荧光蛋白(GFP)的人FoxM1 shRNA重组慢病毒载体,并构建筛选FoxM1敲低的人前列腺癌稳定细胞株,检测FoxM1的表达及对细胞增殖能力的影响。方法 设计并合成3对特异性针对人FoxM1基因的shRNA靶序列,构建到pHBLV-U6-ZsGreen-Puro 慢病毒载体中,测序鉴定载体构建情况,利用慢病毒三质粒系统转染包装293T细胞,荧光显微镜下观察转染效率。收集到的病毒上清转染人前列腺癌DU-145细胞,Real-time PCR检测各组细胞FoxM1 mRNA水平,经嘌呤霉素筛选建立FoxM1敲低稳定细胞株,用Western blotting法检测细胞中FoxM1表达,并用MTT法观察稳转细胞的生长增殖活性,流式细胞术观察稳转细胞凋亡情况,平板克隆实验观察稳转细胞的克隆形成能力。结果 经测序鉴定成功构建了3对FoxM1shRNA慢病毒载体,并进行包装,感染DU-145细胞后Real-time PCR检测结果表明第1对慢病毒载体干扰效率最佳,嘌呤霉素抗性筛选建立了FoxM1敲低稳定细胞株,荧光显微镜观察感染效率较高,Western blotting结果显示细胞中FoxM1蛋白表达明显受到抑制,细胞的生长增殖能力明显受限,流式细胞术结果显示FoxM1敲低组细胞凋亡率高于对照组,平板克隆实验结果表明FoxM1敲低组细胞克隆形成能力下降。结论 本研究成功构建了FoxM1 shRNA慢病毒载体,建立了FoxM1敲低稳定前列腺癌细胞株,抑制细胞内FoxM1的表达能够抑制前列腺癌细胞DU-145的生长增殖、克隆形成能力,并能诱导细胞凋亡。

submitted time 2017-12-07 From cooperative journals:《南方医科大学学报》 Hits435Downloads264 Comment 0

2. chinaXiv:201712.01048 [pdf]

溶质转运体26A家族在HEK-293细胞中的表达和功能

范 超,傅鸣宇,肖中举,唐 杰
Subjects: Medicine, Pharmacy >> Preclinical Medicine

目的构建能在HEK-293细胞膜上表达的溶质转运体26A家族(SLC26A)的蛋白质粒,并对其生理功能进行检测。方法构建多种人类SLC26A转运体一绿色荧光蛋白的融合质粒,并使用瞬时转染技术将其表达在人胚肾293细胞(HEK-293)中。用全细胞膜片钳技术记录表达有SLC26A蛋白的HEK-293细胞的膜电容。结果每个SLC26A转运体均能在HEK-293细胞的细胞膜上表达,并表现出和离子相互作用的生理功能。SLC26A转运体与离子结合的数目与其在细胞膜上的表达程度正相关并具有一定的离子选择性。结论SLC26A转运体家族能够在HEK-293细胞上表达并具有与转运离子结合的生理功能。在HEK-293细胞系中表达SLC26A转运体家族的研究方法,为进一步研究此家族成员转运功能及其转运机制提供了可能。

submitted time 2017-12-07 From cooperative journals:《南方医科大学学报》 Hits175Downloads111 Comment 0

3. chinaXiv:201711.02207 [pdf]

外源Cd 在不同品种水稻组织中的细胞分布和化学形态特征研究

付铄岚; 王昌全; 李 冰; 徐 强; 张敬昇; 李 萌; 唐 杰; 何玉亭; 沈 杰; 曾杰熙; 严 勋
Subjects: Agriculture, Forestry,Livestock & Aquatic Products Science >> Basic Disciplines of Agriculture

采用水培试验, 以低镉(Cd)积累水稻品种‘D83A/R527’和高Cd 积累水稻品种‘辐优838’为供试材料,设置3 个Cd 浓度(5 μmol·L?1、10 μmol·L?1、25 μmol·L?1)处理, 从Cd 亚细胞及化学形态分布角度研究了不同 基因型水稻品种的Cd 积累特性, 为探讨水稻对Cd 的吸收积累生理机制提供科学依据。结果表明: (1)水稻 ‘D83A/R527’的根系和茎叶Cd 含量及根系-茎叶转移系数均显著低于‘辐优838’(P<0.05)。(2)两水稻根系各亚细胞组分中Cd 含量表现为可溶部分(F3)>细胞壁(F1)>细胞器(F2), 茎叶表现为细胞壁(F1)>可溶部分(F3)>细胞器(F2); ‘D83A/R527’根系和茎叶细胞壁Cd 的质量分数(36.76%~51.75%)高于‘辐优838 (31.29%~49.07%)。(3)两水稻品种Cd 化学形态含量均表现为氯化钠提取态(FNaCl-Cd)>醋酸提取态(FHAc-Cd)>去离子水提取态(FW-Cd)>乙醇提取态(FE-Cd)>盐酸提取态(FHCl-Cd); 随Cd 处理浓度的增加,‘D83A/R527’根系FE-Cd 和FW-Cd(活性态Cd)质量分数逐渐下降(24.75%~18.34%), ‘辐优838’活性态Cd 逐渐上升(27.18%~28.68%), 茎叶FHAc-Cd 和FHCl-Cd( 惰性态Cd) 质量分数(32.41%~38.98%) 逐渐上升且高于‘ 辐优838’(28.44%~31.22%),‘D83A/R527’ 根系和茎叶FNaCl-Cd 质量分数(32.71%~51.17%) 均高于‘辐优838’(32.14%~47.63%)。综上,‘D83A/R527’水稻幼苗Cd 积累量低; 与‘辐优838’相比, ‘D83A/R527’水稻幼苗根系和茎叶细胞壁质量分数较高,“活性态”Cd 质量分数较低, “惰性态”Cd 则更高, 表明‘D83A/R527’水稻对Cd 有更强的固持能力。

submitted time 2017-11-09 From cooperative journals:《中国生态农业学报》 Hits631Downloads381 Comment 0

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