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1. chinaXiv:201807.00068 [pdf]

钙库调控的钙通道Orai1体外研究方法的建立

武福云; 姚美连; 吴胜英; 汪雄; 李珊
分类: 生物学 >> 生物工程

目的:建立钙通道Orai1的体外研究方法。方法:利用脂质体重组技术,将体外纯化的Orai1蛋白重组到脂质体膜上,并利用蔗糖密度梯度离心来检测其重组效率及Orai1蛋白在脂质体膜上的结构,并利用钙染料Fura-2检测脂质体内钙离子的释放。结果:成功制备了脂质体及体外纯化了GST-Orai1融合蛋白,蔗糖密度梯度离心结果证明GST-Orai1蛋白成功重组到脂质体上,以及Orai1蛋白以多聚体的形式定位在脂质体膜上。钙离子释放实验证明脂质体内钙离子包装完好,可用于后续Orai1钙通道的功能研究。结论:利用脂质体重组技术建立了一种新的Orai1的研究方法,能够更直接有效地研究其功能及其活化机制。

提交时间: 2018-07-15 来自合作期刊:《中国生物工程杂志》 点击量360下载量13 评论 0

2. chinaXiv:201807.00069 [pdf]

CRISPR/Cas系统作为抗菌药的现状及展望

曾家伟; 侯国锋; 郑继平; 杨诺; 曾纪峰; 郭桂英
分类: 生物学 >> 生物工程

抗生素长期滥用导致了人体内菌群失调及细菌耐药性的产生,因此需要寻找新型、靶向抗菌方法来治疗耐药细菌的感染。近年来,CRISPR/Cas系统的深入研究为设计特异性靶向耐药基因,定向清除耐药细菌的药物提供了新的思路。在此,本文介绍了CRISPR/Cas系统作为新型抗菌方法,通过靶向切割抗性质粒或细菌基因组以实现对耐药基因或病原菌的特异性清除,并对CRISPR抗菌药的不同类型核酸酶的选择,以及CRISPR递送系统的运载工具进行了评价。

提交时间: 2018-07-15 来自合作期刊:《中国生物工程杂志》 点击量399下载量18 评论 0

3. chinaXiv:201807.00070 [pdf]

利用CRISPR/Cas9技术构建AEG-1基因敲除U251细胞系并探讨其转移行为的特点

盛玉瑞; 李斌; 王斌; 左娣; 马琳; 任晓璠; 郭乐; 刘昆梅
分类: 生物学 >> 生物工程

星形胶质细胞上调基因-1(astrocyte elevated gene-1,AEG-1)在多种肿瘤中过表达,参与肿瘤的形成、转移等过程。本实验利用CRISPR/Cas9技术敲除AEG-1基因并研究其在胶质瘤细胞转移过程中的作用。首先设计构建sgRNA/Cas9二合一表达载体并转染到人胶质瘤U251细胞中,通过TA克隆测序鉴定sgRNA的活性;然后筛选建立稳定的AEG-1敲除U251细胞系,并利用Western blot实验检测AEG-1的敲除效率;最后利用Transwell小室、划痕实验评价AEG-1敲除后对肿瘤细胞迁移能力的影响。结果显示,成功构建靶向敲除AEG-1基因的sgRNA/Cas9二合一表达载体,所构建的载体与实验设计相一致,通过TA克隆测序鉴定sgRNA有活性;成功建立稳定的AEG-1敲除U251细胞系,Western blot实验结果表明敲除效率高达98%;Transwell小室实验、划痕实验结果表明AEG-1敲除U251细胞系的转移能力明显降低。

提交时间: 2018-07-15 来自合作期刊:《中国生物工程杂志》 点击量272下载量10 评论 0

4. chinaXiv:201807.00071 [pdf]

脐带间充质干细胞的发现研究及规模化生产

王佃亮
分类: 生物学 >> 生物工程

脐带间充质干细胞来源于人体脐带组织,具有自我复制更新和多向分化潜能,是一种具有许多优势的干细胞类型,可用于治疗老年性退变、帕金森、血管缺血、小儿自闭症、系统性红斑狼疮、强直性脊柱炎、多发性神经硬化症、糖尿病、各种创伤、移植物抗宿主病等常规治疗方法难以治愈的疾病,并且治疗效果明确。本文介绍了脐带间充质干细胞的研究发现历程,临床应用价值,分离制备和检测鉴定方法,生物学特性以及规模化生产技术。需要强调的是,脐带间充质干细胞具有比其他一些干细胞(如脐带造血干细胞、骨髓造血干细胞、骨髓间充质干细胞等)没有的优势,材料来源广泛,细胞增殖能力强,没有伦理问题。脐带间充质干细胞的生产和应用应遵循政府或机构颁布的相关法律法规和标准规范。

提交时间: 2018-07-15 来自合作期刊:《中国生物工程杂志》 点击量228下载量11 评论 0

5. chinaXiv:201807.00072 [pdf]

云南德宏傣族传统村落植物景观及应用研究

周静帆; 欧杨; 周丽; 刘昕岑; 包蓉
分类: 生物学 >> 植物学

传统村落的植物景观,反应了一个民族在长期实践中积累的植物认知和应用经验,兼具地域自然性与文化性,从而对村落生态环境建设及民族植物的可持续性利用具有重要参考意义。该研究对云南省德宏州大盈江、瑞丽江流域的19个傣族传统村落进行植物景观及应用调查。结果表明:德宏傣族传统村落植物景观水平分布为寨外(山林绿块+农田绿块+护堤绿带)——寨边(防护绿环+高山榕绿块)——寨内(绿点+绿线)的格局;垂直分布有5个景观层次;村寨内常见植物共181种,73科;村寨内植物多为人工栽培,具较强实用性,主要应用功能集中在食用、药用、观赏、防护隔离、香薰调味等方面;傣寨植物人文景观具宗教色彩。建议加强植物水平分布的空间联系,建立稳定的绿地系统格局;保持植物垂直景观层次,推广植物的建造功能应用;充分利用植物资源,形成产业优势;传承优秀的植物文化景观。最终,推广植物在村落建设中的传统应用经验,促进民族村落与植物的可持续保护与发展。该研究成果对德宏傣族人居环境建设与民族植物学应用提供了科学依据。

提交时间: 2018-07-13 来自合作期刊:《广西植物》 点击量291下载量13 评论 0

6. chinaXiv:201807.00038 [pdf]

S100A9参与乙型肝炎病毒X蛋白介导的HepG2细胞增殖与迁移

张秀瑜; 王玎; 杜燕娥; 武睿; 段亮
分类: 生物学 >> 生物工程

目的:探讨S100A9在乙型肝炎病毒X(HBx)介导的HepG2细胞增殖及迁移中的作用。方法:用表达HBx蛋白的重组腺病毒AdHBx感染HepG2细胞后,用CCK-8实验检测细胞增殖能力及划痕愈合实验检测细胞迁移能力;在HepG2/AdHBx细胞中转染S100A9-siRNA及其对照siRNA后,检测HepG2细胞增殖及迁移能力;在HepG2/AdHBx和对照组HepG2/AdGFP细胞中,采用Real- time PCR及Western Blot检测S100A9基因及蛋白的表达情况;在HepG2/AdHBx细胞中,加入不同剂量的NF-κB抑制剂BAY11-7082后,检测各组中S100A9的基因及蛋白表达情况。结果:HBx促进HepG2细胞的增殖与迁移;S100A9-siRNA抑制S100A9的表达后,HBx促进HepG2细胞的增殖与迁移的作用降低,HBx介导的HepG2细胞的增殖与迁移部分依赖于S100A9;S100A9基因及蛋白表达在HepG2/AdHBx中较对照组HepG2/AdGFP显著升高,HBx可致S100A9表达增加;抑制NF-κB转录活性后,AdHBx+BAY11-7082组S100A9基因及蛋白表达较对照组显著降低,阻断NF-κB转录活性可部分抑制HBx调控的S100A9表达。结论:HBx可调控S100A9的表达且与NF-κB活化有关, S100A9参与 HBx介导的HepG2细胞的增殖与迁移。

提交时间: 2018-07-11 来自合作期刊:《中国生物工程杂志》 点击量709下载量60 评论 0

7. chinaXiv:201807.00039 [pdf]

地高辛标记Ucp2 基因RNA探针的制备和应用

刘志贞; 张凯丽; 孙雨晴; 赵虹; 郝宇卉; 李美宁
分类: 生物学 >> 生物工程

目的:为了制备用于检测小鼠胚胎早期Ucp2基因表达的地高辛标记的特异性RNA探针。方法:提取小鼠胚胎脑组织总RNA,设计引物,通过RT -PCR方法获取Ucp2基因片段,将其克隆到pGEM -T载体。分别利用Sp6、T7和Ucp2特异性引物,PCR扩增获得转录模板,通过Sp6及T7 RNA聚合酶,获得地高辛标记的正义、反义Ucp2 RNA原位杂交探针。检测标记探针的效价后,通过全胚胎原位杂交分析制备探针的特异性和杂交效果。结果:成功获得Ucp2基因正义、反义探针,反义探针能高效灵敏检测到Ucp2基因在小鼠胚胎Ed9.5、Ed10.5神经系统呈现高表达,而正义探针未能检测到表达信号。结论:成功制备了特异高效的地高辛标记Ucp2 RNA 原位杂交探针,为进一步研究Ucp2基因在小鼠胚胎组织中的表达,尤其在神经组织的定位奠定基础。

提交时间: 2018-07-11 来自合作期刊:《中国生物工程杂志》 点击量654下载量57 评论 0

8. chinaXiv:201807.00066 [pdf]

华氏巨球蛋白血症相关突变MYD88 L265P新型检测体系的建立

陈弘远; 陈红岩; 乔纯; 李建勇; 卢大儒
分类: 生物学 >> 生物工程

华氏巨球蛋白血症(Waldenström’s macroglobulinemia,WM)是一种罕见的,不可治愈的淋巴浆细胞淋巴瘤(lymphoplasmacytic lymphoma,LPL)。MYD88 L265P突变在华氏巨球蛋白血症患者中检出率很高(>90%),可以用于疾病的鉴别和诊断,因此,开发一种高灵敏度的检测方法对这个突变进行检测具有较大的临床价值。通过将ARMS技术与Clamping PCR技术相结合,建立的新型MYD88 L265P突变富集检测体系可以满足这一需求。优化后,该检测体系检出限为102拷贝,灵敏度为0.1%,对19份临床样品的双盲试验中,检测结果准确率达到100%。所建立的方法具有灵敏、准确的优势,适用于华氏巨球蛋白血症的早期诊断,有较为广阔的应用前景。

提交时间: 2018-07-06 来自合作期刊:《中国生物工程杂志》 点击量557下载量27 评论 0

9. chinaXiv:201807.00032 [pdf]

Characteristics of soil organic carbon and total nitrogen under various grassland types along a transect in a mountain-basin system in Xinjiang, China

BI Xu; LI Bo; NAN Bo; FAN Yao; FU Qi; ZHANG Xinshi
分类: 生物学 >> 生态学

Soil organic carbon (SOC) and soil total nitrogen (STN) in arid regions are important components of global C and the N cycles, and their response to climate change will have important implications for both ecosystem processes and global climate feedbacks. Grassland ecosystems of Funyun County in the southern foot of the Altay Mountains are characterized by complex topography, suggesting large variability in the spatial distribution of SOC and STN. However, there has been little investigation of SOC and STN on grasslands in arid regions with a mountain-basin structure. Therefore, we investigated the characteristics of SOC and STN in different grassland types in a mountain-basin system at the southern foot of the Altai Mountains, north of the Junggar Basin in China, and explored their potential influencing factors and relationships with meteorological factors and soil properties. We found that the concentrations and storages of SOC and STN varied significantly with grassland type, and showed a decreasing trend along a decreasing elevation gradient in alpine meadow, mountain meadow, temperate typical steppe, temperate steppe desert, and temperate steppe desert. In addition, the SOC and STN concentrations decreased with depth, except in the temperate desert steppe. According to Pearson's correlation values and redundancy analysis, the mean annual precipitation, soil moisture content and soil available N concentration were significantly positively correlated with the SOC and STN concentrations. In contrast, the mean annual temperature, pH, and soil bulk density were significantly and negatively correlated with the SOC and STN concentrations. The mean annual precipitation and mean annual temperature were the primary factors related to the SOC and STN concentrations. The distributions of the SOC and STN concentrations were highly regulated by the elevation-induced differences in meteorological factors. Mean annual precipitation and mean annual temperature together explained 97.85% and 98.38% of the overall variations in the SOC and STN concentrations, respectively, at soil depth of 0–40 cm, with precipitation making the greatest contribution. Our results provide a basis for estimating and predicting SOC and STN concentrations in grasslands in arid regions with a mountain-basin structure.

提交时间: 2018-07-05 来自合作期刊:《Journal of Arid Land》 点击量151下载量39 评论 0

10. chinaXiv:201807.00033 [pdf]

Grazing every month minimizes size but boosts photosynthesis in Stipa grandis in the steppe of Inner Mongolia, China

LI Xiaobing; HUANG Qi; MI Xue; BAI Yunxiao; ZHANG Meng; LI Xu
分类: 生物学 >> 植物学

In order to explore the effects of grazing frequency on functional traits and to test whether Stipa gandis has compensatory photosynthesis during the frequent grazing period, we investigated morphological traits, biomass allocation, photosynthetic traits, and chlorophyll fluorescence parameters of the species in Inner Mongolia, China. The grazing frequency treatments included fencing (T0), grazing in May and July (T1, i.e., two months per year) and grazing from May to September (T2, i.e., continuous five months per year). Results indicate that T1 and T2 treatments did not affect individual biomass, but T2 treatment negatively affected individual size, i.e., plant height, stem length, and leaf length. Physiological traits of S. grandis were significantly affected by grazing, year, and their interaction. In July 2014 (i.e., dry environment and low relative humidity), the photosynthetic rate, transpiration rate and water use efficiency were highest under T2 treatment, which was caused by the increase in stomatal conductance. However, in July 2015 (i.e., wet environment and high relative humidity), the photosynthetic rate and water use efficiency were higher under T1 and T2 treatments, which were caused by the increase in actual quantum efficiency and stomatal conductance. Our results implied that under frequent grazing treatment, S. grandis had small height and efficient compensatory photosynthesis, which promoted its resistance to severe grazing.

提交时间: 2018-07-05 来自合作期刊:《Journal of Arid Land》 点击量223下载量35 评论 0

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