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1. chinaXiv:201703.01054 [pdf]

Impaired spinal glucocorticoid receptor signaling contributes to the attenuating effect of depression on mechanical allodynia and thermal hyperalgesia in rats with neuropathic pain

Wei, Xiao; Sun, Yuqi; Luo, Fei
分类: 生物学 >> 神经生物学

Although depression-induced altered pain perception has been described in several laboratory and clinical studies, its neurobiological mechanism in the central nervous system, particularly in the spinal dorsal horn remains unclear. In this study, we therefore aimed to clarify whether nociceptive sensitivity of neuropathic pain is altered in the olfactory bulbectomy (OB) model of depression and whether glucocorticoid receptor (GR), which is involved in the etio-pathologic mechanisms of both major depression and neuropathic pain, contributes to these processes in the spinal dorsal horn of male Sprague-Dawley rats. The results showed that mechanical allodynia and thermal hyperalgesia induced by spinal nerve ligation (SNL) were attenuated in OB-SNL rats with decreased spinal GR expression and nuclear translocation, while NOB (non-olfactory bulbectomy)-SNL rats showed an increased spinal GR nuclear translocation. Decreased GR nuclear translocation with normal mechanical nociception and hypoalgesia of thermal nociception were observed in OB-Sham rats, too. Intrathecal injection of GR agonist dexamethasone (4 µg / rat / day for 1 week) eliminated the attenuating effect of depression on the nociceptive hypersensitivity in OB-SNL rats and aggravated neuropathic pain in NOB-SNL rats, associating with the up-regulation of BDNF, TrkB and NR2B expression in the spinal dorsal horn. The present study shows that depression attenuates the mechanical allodynia and thermal hyperalgesia of neuropathic pain and suggests that altered spinal GR-BDNF-TrkB signaling may be one of the reasons for depression-induced hypoalgesia.

提交时间: 2017年07月24日 点击量:281, 下载量:163

2. chinaXiv:201707.00719 [pdf]

衣藻叶绿体表达重组蛋白及表达优化策略

林优红; 程霞英; 严依雯; 梁宗锁; 杨宗岐
分类: 生物学 >> 生物工程

近年来,转基因技术已日趋成熟,医学、工业上的应用也越来越广泛。以重组蛋白为基础的药物治疗是日前医药生产领域发展最快的一项技术。它们的高特异性和低副作用使得治疗效率十分突出。但是重组蛋白表达的复杂性也给生产带来了一定限制。为了促进重组蛋白的应用,人们对适宜其表达的系统和能促进其表达的策略进行了探索。研究发现,衣藻叶绿体作为重组蛋白的生物反应器,能实现重组蛋白快速、高效、低成本生产。同时,衣藻能在人工培养基和人为控制的条件下生长,降低了受污染的风险。相较于传统的生产系统具有不可比拟的优越性。因此,衣藻叶绿体作为医药重组蛋白生物反应器在未来的生物技术领域将发挥巨大作用。

提交时间: 2017年07月24日 来自合作期刊:《中国生物工程杂志》 点击量:8, 下载量:8

3. chinaXiv:201707.00708 [pdf]

基于电泳温度提升建立大鼠肝快速透明化模型

袁小川; 连芳; 赵荫农; 陈闯; 黄山; 李科志; 曾爱屏; 何剑波; 邬国斌
分类: 生物学 >> 生物工程

目的:探索一种基于CLARITY技术的快速肝组织透明化手段,为该技术在肝脏上的应用提供研究基础。方法:水凝胶灌注大鼠,取出肝脏待水凝胶凝固后切为1mm薄片。切片随机分为两组,对照组采用常规被动脂质清除法处理,实验组置于特制电泳装置中,在外加电场条件下洗涤脂质,通过提高电泳温度并量化组织透明度,探索最优肝透明化条件。结果:实验组在12V电压下37°C电泳48h时肝切片相对透明度达到最高并保持至96h,随后相对透明度开始下降,而在48h电泳清除脂质后提高温度继续电泳48h,肝组织切片相对透明度可进一步提高且对照组脂质清除速度明显低于实验组。结论:在12V电压下肝组织切片37°C电泳48h再辅以52°C电泳48h可以实现较快速的脂质清除。

提交时间: 2017年07月24日 来自合作期刊:《中国生物工程杂志》 点击量:8, 下载量:8

4. chinaXiv:201707.00707 [pdf]

重组杆状病毒细小VP2蛋白40L生物反应器放大工艺研究

苏晓蕊; 李伟国; 王延辉; 高晓静; 闪伊红; 谭菲菲; 李向东; 田克恭
分类: 生物学 >> 生物工程

研究了Sf9细胞生产重组杆状病毒细小VP2蛋白在机械搅拌式生物反应器(STR)中从3L至40L的放大工艺。首先在3L反应器中,通过DO和搅拌转速的优化,使反应器中的VP2蛋白HA效价不低于摇瓶结果。在40L反应器放大时,温度、pH、DO保持不变,根据输入搅拌功率、体积溶氧系数和叶尖线速度等工程参数的计算,得到了该反应器的合理搅拌转速,最终HA效价测定结果与小罐一致。豚鼠免疫试验证实,反应器中表达的VP2蛋白制成疫苗,与HN2011灭活苗及商品化灭活疫苗相比,抗体水平上升较快且高于传统灭活苗。

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5. chinaXiv:201707.00706 [pdf]

抗埃博拉病毒核蛋白抗体的制备与双抗夹心ELISA检测方法的建立

刘俊伟; 常瑞恒; 回鹏; 董士尚; 王金凤; 孙波; 杨诚
分类: 生物学 >> 生物工程

目的 制备抗埃博拉病毒核蛋白(EBOV NP)单克隆抗体和多克隆抗体,建立针对EBOV NP的ELISA检测方法。方法 以重组EBOV NP免疫动物并制备多克隆抗体和单克隆抗体。在此基础上,通过优化抗体浓度、包被液等条件建立检测EBOV NP的双抗夹心ELISA方法。结果 制备出了兔多克隆抗体,筛选出2株可分泌单克隆抗体的鼠源杂交瘤细胞株。Western Blot实验结果表明兔多抗与鼠单抗的结合区域均为N端1~35氨基酸。通过优化,建立了针对EBOV NP的双抗夹心ELISA检测方法。其线性范围是31.2 -1000 ng/mL,最低检测限为2.6 ng/mL。结论 制备出了抗EBOV核蛋白的高特异性多克隆抗体和单克隆抗体,建立了定量检测EBOV核蛋白的方法。

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6. chinaXiv:201707.00705 [pdf]

共价连接BODIPY光敏剂的聚合物纳米胶束及其靶向光动力疗效的研究

周忠厅; 张权; 王胜涛; 蔡颖; 中西秀树; 尹健
分类: 生物学 >> 生物工程

摘要 目的:利用聚合物纳米胶束靶向输送光敏剂分子已经成为光动力治疗癌症的研究热点。方法:本研究采用原子转移自由基聚合反应合成嵌段聚合物聚丙烯酸叔丁酯?聚甲基丙烯酸缩水甘油酯(PtBA-b-PGMA),共聚物的一端脱除叔丁基,通过缩合反应共价键连接甘露糖分子,另一端环氧基开环引入叠氮基,并通过“click”反应共价连接氟硼二吡咯光敏剂分子,最后制备得到表面甘露糖修饰的负载光敏剂聚合物胶束。利用核磁共振氢谱仪和傅立叶变换红外光谱仪进行结构确认;通过透射电镜和动态光散射等考察其理化性质;经激光共聚焦显微镜和MTT细胞毒性实验对其甘露糖受体靶向性及光动力疗效进行考察和评价。结果:聚合物PtBA-b-PGMA的相对分子量为16924,其分散系数为1.36。聚合物中环氧基开环引入叠氮后在2106 cm-1处出现叠氮基特征峰。经过“click”反应引入氟硼二吡咯光敏剂分子后,叠氮基特征峰消失,在1637 cm-1处出现三氮唑特征峰。聚合物胶束粒径分布均一,稳定性良好。胶束平均流体力学直径为178 nm,在水溶液中粒度分布较窄(PDI=0.298)。聚合物胶束对人乳腺癌MDA-MB-231细胞和HEK293正常细胞均无暗毒性,在535 nm LED光照下对乳腺癌MDA-MB-231细胞具有较好的光动力治疗效果。结论:聚合物胶束能被MDA-MB-231癌细胞表面高表达的甘露糖受体特异性识别,并被内吞进入癌细胞内,具有较好的光动力杀伤作用。

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7. chinaXiv:201707.00704 [pdf]

人SP-B蛋白转基因小鼠及细菌性肺炎模型的构建

葛林; 刘新宇; Guirong Wang
分类: 生物学 >> 生物工程

目的:构建携带人SP-B蛋白+1580 SNP不同等位基因的转基因小鼠并进行细菌性肺炎模型的造模。方法:利用受精卵原核注射技术将hSP-B基因整合至小鼠染色体上获得F0代小鼠,将其与mSP-B基因敲除鼠进行交配,逐步去除转基因小鼠体内mSP-B基因。利用PCR技术鉴定小鼠基因型,通过测序确定+1580位点的等位基因。将铜绿假单胞菌经支气管灌注接种至小鼠肺内进行细菌性肺炎造模,对照组注射等量灭菌生理盐水。结果:F2代小鼠只表达人SP-B蛋白而不表达鼠SP-B蛋白,蛋白表达量与人肺内含量相近,即为构建成功的转基因小鼠。3个小鼠家系+1580位点等位基因为T,1个家系为C。细菌接种后24小时,小鼠肺泡内炎症渗出明显,大量中性粒细胞浸润,SP-B蛋白含量明显降低,但不同等位基因间无明显差异。结果:成功构建只表达人SP-B蛋白的转基因小鼠模型,细菌性肺炎模型造模成功,为今后进一步研究人SP-B蛋白的生理功能及+1580基因多态性与肺疾病的关系提供了有力的工具。

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8. chinaXiv:201707.00702 [pdf]

达托霉素,一种新的胰蛋白酶激活剂

杨恬然; 吴世杰; 辛明秀
分类: 生物学 >> 生物工程

本研究首次发现达托霉素是一种新的胰蛋白酶激活剂。当胰蛋白酶与达托霉素的物质的量的比在反应时达到34.05时,达托霉素对胰蛋白酶比活力的激活率平均达到32.92 %。通过计算机模拟技术对达托霉素与胰蛋白酶以及达托霉素对胰蛋白酶底物复合物分别进行分子对接,发现达托霉素与胰蛋白酶的活性中心位置很靠近,达托霉素链状中的天冬氨酸的R基与酶活性中心的组氨酸-57发生了氢键相互作用,推测达托霉素使酶和底物复合物结构更加稳定,从而有利于催化作用。利用等温滴定量热法(Isothermal titration calorimetry,ITC)验证模拟结果,表明胰蛋白酶上具有1 个达托霉素结合位点,解离常数Kd为17.83 μM,摩尔结合焓△H为237.9±28.17 cal·mol-1,摩尔结合熵△S为22.5 cal·mol-1·deg-1。这些结果从热力学角度支持了分子对接结果。本研究发现达托霉素除具有抗革兰氏阳性耐药性细菌的功能外,还能促进胰蛋白酶比活这一新的功能,是一种新的胰蛋白酶激活剂。

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9. chinaXiv:201707.00701 [pdf]

Taqman定量PCR技术检测基因编辑番茄中外源基因拷贝数体系的建立

任爽; 朱鸿亮
分类: 生物学 >> 生物工程

近些年CRISPR/Cas9基因编辑技术已广泛应用于作物遗传育种中,经过拷贝数筛选得到的单拷贝基因编辑株系,可以进行遗传分离获得具有改良性状但不携带外源基因成分的非转基因植株,消除转基因安全性的风险。目前拷贝数的检测主要采用Southern杂交,但是该方法存在操作复杂,需要相对大量的植物材料等缺点,不能进行高通量的筛选。为建立简便高效的基因编辑番茄植株中外源基因拷贝数的检测体系,以内源性基因APX(抗坏血酸过氧化物酶基因)作为内参基因,外源性基因HPT(潮霉素磷酸转移酶基因)作为目的基因,利用Taqman法的实时荧光定量PCR技术,检测有12株PDS基因(八氢番茄红素脱氢酶基因)编辑番茄中外源抗性基因HPT的拷贝数为1,初步建立了一种检测基因编辑植株中外源基因整合拷贝数的方法,为快速可靠的筛选单拷贝改良株系奠定了一定的技术基础。

提交时间: 2017年07月24日 来自合作期刊:《中国生物工程杂志》 点击量:3, 下载量:3

10. chinaXiv:201707.00700 [pdf]

间充质干细胞治疗产品开发现状与趋势

毛开云; 范月蕾; 王跃; 陆娇; 陈大明
分类: 生物学 >> 生物工程

目的:从产品开发角度分析间充质干细胞治疗产品的发展现状和未来趋势。方法:检索科睿唯安(Clarivate Analytics)的Cortellis数据库的数据,利用定量分析法和对比分析法对检索结果进行分析。结果:目前已有5种间充质干细胞治疗产品上市,9种间充质干细胞治疗产品处于注册及临床Ⅲ期,未来市场上的间充质干细胞治疗产品将呈现快速增长趋势。Mesoblast、FCB等公司在间充质干细胞治疗产品的拥有量上具有优势。间充质干细胞产业内部的商业交易也越来越多,目前共发生包括药物开发及商业化许可、专利资产出售以及早期药物研发合作等12起交易,其中药物开发及商业化许可是最主要的交易模式。尽管中国的间充质干细胞治疗产品研究尚处于起步阶段,但中国的西比曼生物、北科生物等公司已有多款产品处于临床阶段,中国本土的间充质干细胞治疗产品前景可期。结论:虽然间充质干细胞治疗产品市场尚处于起步阶段,但其技术发展快,市场需求大,相关企业产品研发与商品化积极性高,上升潜力巨大。

提交时间: 2017年07月24日 来自合作期刊:《中国生物工程杂志》 点击量:5, 下载量:5

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