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1. chinaXiv:201703.01054 [pdf]

Impaired spinal glucocorticoid receptor signaling contributes to the attenuating effect of depression on mechanical allodynia and thermal hyperalgesia in rats with neuropathic pain

Wei, Xiao; Sun, Yuqi; Luo, Fei
分类: 生物学 >> 神经生物学

Although depression-induced altered pain perception has been described in several laboratory and clinical studies, its neurobiological mechanism in the central nervous system, particularly in the spinal dorsal horn remains unclear. In this study, we therefore aimed to clarify whether nociceptive sensitivity of neuropathic pain is altered in the olfactory bulbectomy (OB) model of depression and whether glucocorticoid receptor (GR), which is involved in the etio-pathologic mechanisms of both major depression and neuropathic pain, contributes to these processes in the spinal dorsal horn of male Sprague-Dawley rats. The results showed that mechanical allodynia and thermal hyperalgesia induced by spinal nerve ligation (SNL) were attenuated in OB-SNL rats with decreased spinal GR expression and nuclear translocation, while NOB (non-olfactory bulbectomy)-SNL rats showed an increased spinal GR nuclear translocation. Decreased GR nuclear translocation with normal mechanical nociception and hypoalgesia of thermal nociception were observed in OB-Sham rats, too. Intrathecal injection of GR agonist dexamethasone (4 µg / rat / day for 1 week) eliminated the attenuating effect of depression on the nociceptive hypersensitivity in OB-SNL rats and aggravated neuropathic pain in NOB-SNL rats, associating with the up-regulation of BDNF, TrkB and NR2B expression in the spinal dorsal horn. The present study shows that depression attenuates the mechanical allodynia and thermal hyperalgesia of neuropathic pain and suggests that altered spinal GR-BDNF-TrkB signaling may be one of the reasons for depression-induced hypoalgesia.

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2. chinaXiv:201707.00839 [pdf]

金属离子对细胞自噬的诱导作用

李生
分类: 生物学 >> 生物工程

自噬是真核生物普遍存在的通过溶酶体降解错误折叠的蛋白质、异常的细胞器从而循环利用自身内含物的重要生理过程。细胞自噬广泛参与多种病理和生理过程,是当前生物医学领域研究的热点之一。自噬的分子机制能够揭示自噬本质,不仅有利于理解自噬的生理意义,也有利于寻找新的药物靶点为治疗疾病提供理论基础。金属离子能通过不同的信号通路诱导自噬,其研究对药物开发和疾病治疗具有重要的意义。本综述主要从自噬的分子机制、金属离子的诱导作用两方面进行阐述。

提交时间: 2017-07-24 来自合作期刊:《中国生物工程杂志》 点击量20下载量13 评论 0

3. chinaXiv:201707.00838 [pdf]

细菌性腹泻三联口服疫苗的研制及其免疫效果的初步评价

刘地; 晏婷; 何秀娟; 郑文云; 马兴元
分类: 生物学 >> 生物工程

由细菌引起的感染性腹泻,至今仍是世界范围广泛流行的传染病之一。由于耐抗生素病原菌的不断涌现,导致了抗生素药物的治疗效果不佳。因此,研发便捷、有效的疫苗对于细菌性腹泻的预防与治疗尤为重要。针对产肠毒素大肠杆菌、霍乱弧菌与志贺氏痢疾菌,这三种最为主要的细菌性腹泻病原菌,设计和筛选了以热不稳定肠毒素亚基蛋白为抗原和粘膜佐剂、霍乱弧菌鞭毛蛋白以及志贺毒素亚基蛋白为抗原的三联疫苗。通过工程大肠杆菌获得了相应的抗原与佐剂蛋白,并以海藻酸钙-壳聚糖微球为疫苗的口服载体,制备了疫苗的口服制剂。体外实验表明,微球载体中的蛋白在模拟胃液中释放较低,但在模拟肠液中释放迅速,这种载体能够实现疫苗在肠道内定向释放的目的。通过对灌胃免疫后小鼠免疫指标的检测,证明了疫苗能够刺激机体产生抗原特异性的sIgA与IgG抗体,免疫组与对照组相比,差异显著(P<0.05),并提升了外周血中CD4+T细胞的含量(7.5%-9.5%)与CD4+T/CD8+T细胞的比率,有效地激活了机体的粘膜免疫与系统免疫,能够对机体起到保护作用。

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4. chinaXiv:201707.00836 [pdf]

罕见病药物市场与管理

李敏
分类: 生物学 >> 生物工程

罕见病,又称“孤儿病”,是指发病率极低的疾病,绝大部分属于先天性疾病、慢性病,且常常危及生命。近年来,随着公众认知度的提高、国家政策的支持、诊断及治疗技术的进步,罕见病药物市场逐渐发展起来,销售额逐年增加,出现多个“重磅炸弹”级药物。国际大型药企开始抢占罕见病药物市场并且加紧药物研发,目前正在研发的罕见病药物有500多个,主要针对罕见癌症、遗传性疾病、神经类疾病、传染性疾病和自身免疫性疾病等。发达国家和地区在罕见病管理及市场发展方面都已经比较完善,而中国在这方面还比较落后。本文分析了中国罕见病药物市场的发展困境并提出了几点建议,希望能够促进国内罕见病药物市场的快速发展。

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5. chinaXiv:201707.00835 [pdf]

密码子优化后的αB-晶状体蛋白基因毕赤酵母重组质粒的构建及表达的初步研究

冯雪; 刘堰; 牛纯青; 高香
分类: 生物学 >> 生物工程

αB-晶状体蛋白属于小热休克蛋白蛋白家族,具有分子伴侣活性。在阿尔茨海默病大脑中,星形胶质细胞表达的αB-晶状体蛋白明显上调,并且这些上调的αB-晶状体蛋白紧密地分布在β-淀粉样蛋白沉积周围。为了在分子水平上研究胞外αB-晶状体蛋白在阿尔茨海默病中的作用机制,需要获得大量具有生物学活性的αB-晶状体蛋白。根据毕赤酵母密码子偏好性对人αB-晶状体蛋白基因进行优化,并在目的基因3’端加上6个组氨酸标签,优化后的基因克隆到巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)表达载体pPIC9K上;电转入毕赤酵母GS115中;优化确定最佳表达条件为:BMGY与BMMY的转接比为2:1,表达时间为72h,甲醇补加终浓度为0.5%;经Western-blotting鉴定,获得20kDa的目的蛋白,以及18.6kDa及13.1kDa两个个蛋白片段,重组目的蛋白出现了部分降解,纯化获得20 kDa目的蛋白;利用胰岛素还原法测定该片段具有分子伴侣活性,为进一步研究外源αB-晶状体蛋白在阿尔茨海默病中对星形胶质细胞的保护机制奠定基础。

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6. chinaXiv:201707.00834 [pdf]

融合酰基载体蛋白可增强大肠杆菌重组蛋白的可溶性和热稳定性

刘延娟; 李旭娟; 袁航; 刘娴; 高艳秀; 龚明; 邹竹荣
分类: 生物学 >> 生物工程

目前,蛋白可溶性和热稳定性已成为重组蛋白高效生产、功能应用和长久保存不可回避的问题,而使用酸性蛋白融合标签可能是其有效解决策略。酰基载体蛋白(ACP)是脂肪酸生物合成途径的必要组分,在大肠杆菌中为一个高度酸性的小分子多肽。将大肠杆菌ACP与几个热不稳定的靶蛋白(如小桐子抗坏血酸过氧化物酶1(JcAPX1)、大豆核酮糖-1,5-二磷酸羧化/加氧酶的活化酶2(GmRCA2)、大肠杆菌高丝氨酸O-转琥珀酰酶(EcMetA))进行基因融合并使其在大肠杆菌中诱导表达,发现ACP融合能显著增强这些重组靶蛋白的可溶性。另外,对重组蛋白的热处理和酶活性分析发现,融合ACP还能极大提高这三个靶蛋白的热稳定性,并有效保护JcAPX1酶活免遭热失活,使其耐热性提高了至少2℃。ACP的这种效果推测可能与其高酸度特性有关,可以作为一个新的功能酸性融合标签。

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7. chinaXiv:201707.00833 [pdf]

人源Alu RNA工程菌的构建和表达

尹舒贤; 赵月华; 刘超; 吕占军; 王秀芳
分类: 生物学 >> 生物工程

目的:外源RNA导入细胞特异性上调或下调基因表达,目前外源RNA的制备方法主要有化学合成,体外转录,细胞提取。Alu DNA和Alu RNA是人基因组和转录组中最重要的成分,参与基因表达调节。建立工程菌制备基因工程人源Alu RNA (Alu RNA)的技术,所提取的RNA满足一般生物学实验要求。方法和结果:将人Alu序列插入pET-28α质粒 (pET),转化BL-21菌,探讨不同条件对Alu RNA产生的影响。用pET-Alu×8质粒转化BMBL-21(DE3)感受态细胞(简称DE3),异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导减弱细菌生长;用IPTG诱导2,4,6,8,10,12,14和16小时,用northern杂交检测Alu RNA的量,发现诱导4小时RNA产量最高;1,2,4,8,14拷贝的Alu序列插入pET,转化DE3菌,随拷贝数增加Alu RNA产量上升;pET-Alu×8 DE3菌液,不加IPTG诱导,没有Alu RNA产生,0.1-0.4 mg / ml IPTG诱导时,Alu RNA产量没有区别,偏离该浓度时,RNA产量略下降;34 ℃,37 ℃和40 ℃培养pET-Alu×8 DE3菌液,IPTG诱导4小时,在37 ℃培养条件下,RNA产量最高;将pET-Alu×8质粒转化3种BL-21感受态细胞,包括DE3,BMBL21-DE3-pLysS(简称pLysS)和Trans BL 21(简称TransBL),发现转化DE3感受态细胞后Alu RNA产量最高。结论:本文中建立了基因工程制备Alu RNA的技术:pET-Alu×14 质粒转化DE3菌,37 ℃培养至600 nm OD 1.0时,加入终浓度为0.2 mg/ml IPTG诱导4小时,获得最高Alu RNA产量,纯Alu RNA在提取的RNA中的含量达15.8 %,每100 ml菌液纯Alu RNA产量平均为0.46 mg。

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8. chinaXiv:201707.00832 [pdf]

同源过表达BglR对嗜热毁丝霉β-葡萄糖苷酶活性的影响

来亚鹏; 邓婷婷; 刘刚; 王娟
分类: 生物学 >> 生物工程

目的:克隆嗜热毁丝霉(Myceliophthora thermophila ATCC42464)bglr基因,构建Mtbglr 过表达载体,研究同源过表达bglr对嗜热毁丝霉β-葡萄糖苷酶活性及总纤维素酶活性的影响。方法:利用SLIC技术构建Mtbglr 过表达载体;使用MtPpdc启动子及MtTpdc终止子将该基因进行同源过表达;利用原生质体转化、实时荧光定量PCR和酶活测定等技术实现bglr基因在嗜热毁丝霉中表达及酶活水平的鉴定。结果:成功构建Mtbglr过表达载体,并转化嗜热毁丝霉,结果表明诱导培养条件下,转化子Mt8菌株的β-葡萄糖苷酶活性和胞外蛋白浓度分别是WT菌株的1.7和1.9倍。结论:bglr基因对嗜热毁丝霉β-葡萄糖苷酶活性具有增强作用,为嗜热真菌β-葡萄糖苷酶基因调控奠定了理论基础。

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9. chinaXiv:201707.00831 [pdf]

人巨细胞病毒抗原表位的重组表达及免疫原性分析

王蒙; 孙文辉; 姬芳玲; 蒲中机; 李寅生; 包永明
分类: 生物学 >> 生物工程

目的 用大肠杆菌表达系统表达人巨细胞病毒(HCMV)pp65蛋白和gB蛋白的优势抗原表位基因,制成HCMV亚单位疫苗,探究其在Balb/c小鼠体内的体液免疫和细胞免疫活性。方法 选取pp65蛋白的490aa-508aa和gB蛋白的607aa-621aa的基因片段,经PCR扩增目的片段,连接表达载体pET-32a(+),转化BL21(DE3)plys菌株,十二烷基硫酸钠—聚丙稀酰胺凝胶(SDS-PAGE)分析蛋白表达,金属螯合亲和镍柱法纯化目的蛋白。重组蛋白免疫Balb/c小鼠,Western blotting法和间接ELISA法检测重组蛋白的体液免疫活性;通过流式细胞仪和双抗夹心ELISA法检测重组蛋白的细胞免疫活性。结果 获得相对分子质量约为22kDa的融合蛋白,Western blotting检测显示抗体有特异性,间接ELISA法检测其效价为1:102400。与对照组相比,实验组小鼠外周血中CD4+T细胞和CD8+T细胞的数量以及IFN-γ,IL-2,IL-12的含量有显著提高(P<0.01)。结论 制备的具有免疫优势抗原表位的重组蛋白能诱导小鼠产生较强的体液免疫和细胞免疫反应。

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10. chinaXiv:201707.00830 [pdf]

以大肠杆菌为底盘细胞构建XylR-Pu线路检测2,4,6-三硝基甲苯

温国霞; 黄子豪; 谭俊杰; 阚乃鹏; 凌静怡; 张霞; 刘刚; 陈惠鹏
分类: 生物学 >> 生物工程

目的:恶臭假单胞菌中的TOL质粒上的XylR-Pu是经典的甲苯代谢通路,在甲苯类化合物存在时,调控蛋白XylR可以特异性的激活Pu启动子,进而启动相应甲苯代谢通路的表达。基于合成生物学的思想,优化设计此通路并导入遗传背景清楚、操作简单的大肠杆菌中构建全细胞生物传感器,用于检测环境污染物2,4,6-三硝基甲苯(TNT)。方法:以pETDuet-1为载体骨架,构建了XylR-Pu基因线路,并以绿色荧光蛋白GFP为报告分子,GFP的荧光值可以指征结合诱导剂后的XylR蛋白对Pu启动子的诱导强度,并在基因线路中加入四串联终止序列来降低背景值。最后对XylR蛋白的信号识别区进行连续易错PCR,构建随机突变体文库,从中筛选具有更高感应强度、更好灵敏度及特异性的调控蛋白。结果:四串联终止序列可有效降低XylR-Pu通路的背景值,随机突变体文库中筛选出的生物元件eX0-4,对TNT表现出良好的感应强度、灵敏度以及特异性。结论:XylR蛋白在大肠杆菌中对硝基苯响应不明显,但筛选得到的突变蛋白eX0-4,为后续生物传感器的更深层次地开发提供了优良的元件储备;另外利用易错PCR构建随机突变体文库从中筛选发挥预定功能的突变蛋白也可成为挖掘生物元件的一种通用方法。

提交时间: 2017-07-24 来自合作期刊:《中国生物工程杂志》 点击量41下载量29 评论 0

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