分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2017-11-21 合作期刊: 《中国生物工程杂志》
摘要： [目的] 亮氨酸拉链转录因子1（LZTFL1）是一种与纤毛信号传导相关的蛋白，关于其如何在信号传导中发挥作用以及作用机理目前尚不清楚。莱茵衣藻（Chlamydomonas reinhardtii）是研究纤毛信号传导的模式生物，而目前对莱茵衣藻LZTFL1蛋白的研究甚少，尚未有相应的检测抗体，因此制备LZTFL1多克隆抗体用于后续实验研究。[方法] 采用RT-PCR技术从C. reinhardtii CC125中提取总RNA，扩增981 bp的目的基因Lztfl1，插入到pET-28a(+)原核表达载体，成功构建pET-28a(+)-Lztfl1重组质粒，转入E.coli BL21（DE3）经IPTG诱导后成功表达6×His-LZTFL1融合蛋白，融合蛋白经亲和纯化后免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体，最后采用间接ELISA法测得抗血清效价达到1:512 000，经Western blot对C. reinhardtii CC125检测具有较高特异性。[结果]首次实现了莱茵衣藻LZTFL1蛋白的原核表达，制备出一支兔抗莱茵衣藻LZTFL1蛋白的多克隆抗体，为后续研究LZTFL1蛋白在莱茵衣藻中的结构功能及在纤毛信号传导中的相互作用奠定了基础。
分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2017-11-21 合作期刊: 《中国生物工程杂志》
摘要： [目的] 亮氨酸拉链转录因子1（LZTFL1）是一种与纤毛信号传导相关的蛋白，关于其如何在信号传导中发挥作用以及作用机理目前尚不清楚。莱茵衣藻（Chlamydomonas reinhardtii）是研究纤毛信号传导的模式生物，而目前对莱茵衣藻LZTFL1蛋白的研究甚少，尚未有相应的检测抗体，因此制备LZTFL1多克隆抗体用于后续实验研究。[方法] 采用RT-PCR技术从C. reinhardtii CC125中提取总RNA，扩增981 bp的目的基因Lztfl1，插入到pET-28a(+)原核表达载体，成功构建pET-28a(+)-Lztfl1重组质粒，转入E.coli BL21（DE3）经IPTG诱导后成功表达6×His-LZTFL1融合蛋白，融合蛋白经亲和纯化后免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体，最后采用间接ELISA法测得抗血清效价达到1:512 000，经Western blot对C. reinhardtii CC125检测具有较高特异性。[结果]首次实现了莱茵衣藻LZTFL1蛋白的原核表达，制备出一支兔抗莱茵衣藻LZTFL1蛋白的多克隆抗体，为后续研究LZTFL1蛋白在莱茵衣藻中的结构功能及在纤毛信号传导中的相互作用奠定了基础。
分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2017-07-24 合作期刊: 《中国生物工程杂志》
摘要： [目的] 亮氨酸拉链转录因子1（LZTFL1）是一种与纤毛信号传导相关的蛋白，关于其如何在信号传导中发挥作用以及作用机理目前尚不清楚。莱茵衣藻（Chlamydomonas reinhardtii）是研究纤毛信号传导的模式生物，而目前对莱茵衣藻LZTFL1蛋白的研究甚少，尚未有相应的检测抗体，因此制备LZTFL1多克隆抗体用于后续实验研究。[方法] 采用RT-PCR技术从C. reinhardtii CC125中提取总RNA，扩增981 bp的目的基因Lztfl1，插入到pET-28a(+)原核表达载体，成功构建pET-28a(+)-Lztfl1重组质粒，转入E.coli BL21（DE3）经IPTG诱导后成功表达6×His-LZTFL1融合蛋白，融合蛋白经亲和纯化后免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体，最后采用间接ELISA法测得抗血清效价达到1:512 000，经Western blot对C. reinhardtii CC125检测具有较高特异性。[结果]首次实现了莱茵衣藻LZTFL1蛋白的原核表达，制备出一支兔抗莱茵衣藻LZTFL1蛋白的多克隆抗体，为后续研究LZTFL1蛋白在莱茵衣藻中的结构功能及在纤毛信号传导中的相互作用奠定了基础。
分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2017-06-01 合作期刊: 《中国生物工程杂志》
摘要： 胆固醇氧化酶是胆固醇代谢过程中的关键酶，临床上用胆固醇氧化酶作为检测血清胆固醇含量的应用潜力巨大。将来源于红球菌Rhodococcus ruber的胆固醇氧化酶ChOG，分别转化到大肠杆菌宿主BL21(DE3)和Rosetta(DE3)中，在不同条件下进行诱导表达，结果表明：BL21(DE3)菌株在诱导温度为16 ℃、IPTG浓度为0.1 mmol/L时，ChOG可溶性表达量最高 (0.49 mg/mL)。ChOG的最适反应温度为30℃，最适反应pH为7.5。最适反应条件下，酶活性达到8.033 U/mg。利用TLC、HPLC对ChOG催化产物胆甾-4-烯-3-酮进行了鉴定分析。三维结构及定点突变分析表明Glu406及Arg408、Glu261在进行胆固醇C3羟基的脱氢、质子传递，以及底物异构化发挥重要作用。
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