Taqman定量PCR技术检测基因编辑番茄中外源基因拷贝数体系的建立

摘要: 近些年CRISPR/Cas9基因编辑技术已广泛应用于作物遗传育种中，经过拷贝数筛选得到的单拷贝基因编辑株系，可以进行遗传分离获得具有改良性状但不携带外源基因成分的非转基因植株，消除转基因安全性的风险。目前拷贝数的检测主要采用Southern杂交，但是该方法存在操作复杂，需要相对大量的植物材料等缺点，不能进行高通量的筛选。为建立简便高效的基因编辑番茄植株中外源基因拷贝数的检测体系，以内源性基因APX（抗坏血酸过氧化物酶基因）作为内参基因，外源性基因HPT（潮霉素磷酸转移酶基因）作为目的基因，利用Taqman法的实时荧光定量PCR技术，检测有12株PDS基因（八氢番茄红素脱氢酶基因）编辑番茄中外源抗性基因HPT的拷贝数为1，初步建立了一种检测基因编辑植株中外源基因整合拷贝数的方法，为快速可靠的筛选单拷贝改良株系奠定了一定的技术基础。