转基因水稻BPL9K-2事件特异性检测方法的建立

摘要: 利用hiTAIL-PCR(High efficient thermal asymmetric interlaced PCR)法扩增获得了转基因水稻BPL9K-2的外源基因插入位点的左旁侧序列450 bp，与水稻参考基因组数据比对发现其左边界插入在水稻基因组第10号染色体短臂的1037765位核苷酸残基之后。根据水稻参考基因组序列和外源基因右边界序列，设计引物扩增得到485 bp的特异片段，通过数据库比对发现其右边界插入在水稻基因组第10号染色体短臂的1037825位核苷酸残基之前。因为外源基因插入和非正常重组，水稻基因组上缺失了59个核苷酸。基于左右旁侧序列，建立了转基因水稻BPL9K-2的事件特异性定性PCR检测方法，可以分别扩增到片段大小为449 bp和485 bp的特异条带。该方法特异性好，灵敏度高，能够在BPL9K-2基因组DNA相对含量为0.1%的模板中检测出转基因成份。依据旁侧序列，建立了快速鉴定转基因后代植株外源基因型的三引物PCR检测方法。这些方法的建立，为转基因水稻BPL9K-2的应用和检测提供了技术支持。