重组鹅β-防御素7蛋白的原核表达及其生物学特性分析

摘要: 为探讨鹅β-防御素7（AvBD7）的生物学特性，将鹅AvBD7基因亚克隆到大肠杆菌原核表达载体pProEX HTa的EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切位点上，构建重组表达质粒pProEX-AvBD7，将重组质粒转化到大肠杆菌Rosetta感受态细胞中，用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）对其菌液进行诱导表达。经N-三(羟甲基)甲基甘氨酸十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳（Tricine-SDS-PAGE）分析，该重组蛋白大小在10~15 ku，与预期大小结果一致。重组鹅AvBD7蛋白纯化后，通过菌落计数的方法测定其体外抗大肠杆菌、鸡白痢沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、四联球菌、枯草芽孢杆菌等抑菌活性，盐离子浓度对其抗菌活性的影响及其对鸡红细胞的溶血活性。结果显示，重组鹅AvBD7蛋白对所测定的5种细菌均有抗菌活性，且其抑菌活性随蛋白浓度的增加而增强。高浓度盐离子（150 mmol/L）显著抑制重组鹅AvBD7蛋白的抗菌活性（P<0.05）。重组鹅AvBD7蛋白对鸡红细胞没有溶血活性（P>0.05）。由此可见，重组鹅AvBD7蛋白具有广谱抗菌活性，高浓度盐离子显著降低其抗菌活性，且该重组蛋白不具有溶血活性。